Question

19．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細胞．科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療．其技術(shù)流程如下圖：

（1）步驟①中所選的卵母細胞應(yīng)處于減數(shù)第二次分裂中（MⅡ中）期．
（2）步驟②中，分離出ES細胞比體細胞全能性高．
（3）步驟③中，首先要獲取目的基因，以下幾種方法中需要模板的是BC
A．從基因組文庫中獲取目的基因           B．利用PCR 技術(shù)擴增目的基因
C．構(gòu)建cDNA 文庫                       D．通過DNA 合成儀利用化學(xué)方法人工合成目的基因
（4）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的基因表達載體（重組質(zhì)粒）．
（5）為檢測Rag₂基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag₂蛋白的抗體進行抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 1、動物核移植的概念：將動物的一個細胞的細胞核移入一個去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體．
2、胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細胞團）．
3、在基因工程中，目的基因和質(zhì)粒需要用同種限制酶進行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒．
4、目的基因分子水平上的檢測：
①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)

解答 解：（1）步驟①核移植中所選的卵母細胞應(yīng)處于減數(shù)第二次分裂中期．
（2）胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細胞團）．故步驟②中，ES細胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細胞體積小，細胞核大，核仁明顯的特點，ES細胞比體細胞全能性高．
（3）利用PCR 技術(shù)擴增目的基因技術(shù)和構(gòu)建cDNA文庫都需要需要模板的．
（4）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的基因表達載體（重組質(zhì)粒），是核心環(huán)節(jié)．
（5）基因表達的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，所以提取小鼠骨髓細胞的蛋白質(zhì)進行抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）減數(shù)第二次分裂中（MⅡ中）   
（2）高　　　
（3）BC
（4）基因表達載體（重組質(zhì)粒）    
（5）抗原-抗體雜交

點評 題以基因治療的流程圖為載體，考查了基因工程、細胞工程以及胚胎工程等方面的知識，難度適中．考生要能夠識記細胞核移植的過程；識記囊胚包括內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層兩部分；明確基因工程中質(zhì)粒和目的基因需要利用同種限制酶進行切割；掌握目的基因檢測和鑒定的一般方法等．