Question

12．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射 ①促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經過 ②獲能處理，才具備受精能力．
（2）將htPA基因與質粒構建重組表達載體的過程中，下列哪項是必需的（③A）
A．限制酶和DNA連接酶      B．DNA連接酶和DNA聚合酶
C．DNA聚合酶和逆轉錄酶    D．限制酶和DNA聚合酶
（3）轉基因羊的培育過程中，常用受精卵作為外源基因的受體細胞，主要原因是 ④受精卵的全能性易于表達．
為了獲得母羊，胚胎移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行 ⑤性別鑒定．利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這些個體的基因型 ⑥相同．
（4）若在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到 ⑦htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
（5）質粒是基因工程中常用的基因載體，下列哪項不是質粒作為基因載體必需的（⑧D）
A．具控制質粒轉移的基因        B．具標記基因      C．具多個限制酶的單切點        D．具有終止密碼．

Answer 1

分析 DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．
該基因工程需要對羊的性別進行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進行移植．

解答 解：（1）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經過獲能處理，才具備受精能力．
（2）將htPA基因與質粒構建重組表達載體的過程中，需要用到的工具酶為限制酶和DNA連接酶．
（3）轉基因羊的培育過程中，常用受精卵作為外源基因的受體細胞，主要原因是受精卵的全能性易于表達．為了獲得母羊，胚胎移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這些個體的生殖方式屬于無性生殖，這些個體的基因型相同．
（4）若在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
（5）作為運載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點； ②要有標記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選；③能在宿主細胞中穩(wěn)定存在并復制；④是安全的，對受體細胞無害，而且要易從供體細胞分離出來．而終止密碼存在于mRNA上，不存在于質粒．
故答案為：
（1）促性腺激素    獲能處理
（2）A
（3）受精卵的全能性易于表達    性別鑒定    相同
（4）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）
（5）D

點評 本題考查了基因工程和胚胎工程的相關知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；明確該基因工程中需要選擇母羊進行胚胎移植；要求考生具有扎實的基礎知識，難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的考查．