Question

20．在盛產(chǎn)柿子的某地，生物小組開展柿子酒、柿子醋生產(chǎn)的相關活動．
（1）土壤中的酵母菌計數(shù)：
在秋季的柿子園中，落地的柿子流出果汁的周圍土壤中有酵母菌大量生長繁殖．
①用滅過菌的小鐵鏟、信封取該處土樣、并在火焰②旁稱取10g土樣，加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中，充分搖勻．而后進行系列稀釋操作；吸取錐形瓶中土壤液的上清液1ml，轉移至盛有9ml無菌水的大試管中充分搖勻，依次等比稀釋，獲得稀釋至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀釋液．
②為測定土壤中酵母菌的數(shù)量，選用第①步中所獲得的10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀釋液，并依次分別吸取0.1ml進行平板涂布操作．在適宜條件下培養(yǎng)，當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，對各稀釋度涂布的三個平板進行菌落計數(shù)（如表）．

序號	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ
稀釋度104倍	5	8	3
稀釋度103倍	178	191	156
稀釋度102倍	418	511	389

則每克土壤樣品中的酵母菌數(shù)量約為1.75×10⁷個．要使該實驗所得數(shù)據(jù)可靠，還應該實施的操作是同時在各稀釋度組中，另加一個平板接種無菌水作為對照．
（2）柿子醋生產(chǎn)菌的制備：
為去掉酵母菌，挑取變酸的柿子酒內(nèi)的菌膜于30〜35℃進行純化培養(yǎng)，獲得圖1所示菌落分布．應從丙（填“甲”“乙”或“丙”）區(qū)域中挑取部分菌落制玻片觀察，選擇所需菌種．
（3）柿子酒、柿子醋的制作（發(fā)酵裝置如圖2所示）：
①排氣口彎管設置的目的是在酒精發(fā)酵時用來排出C0₂，防止空氣中微生物的污染．
②可通過裝置中的出料口對發(fā)酵情況進行及時監(jiān)測．此時，若采用血細胞計數(shù)板對發(fā)酵液的酵母菌觀察計數(shù)，與（1）中計數(shù)方法相比，該計數(shù)方法測得的酵母菌數(shù)目較多．
③柿子醋可在柿子酒生產(chǎn)的基礎上改變菌種和環(huán)境條件進行生產(chǎn)．

Answer 1

分析 1、從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選目的菌的培養(yǎng)基應該是選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基制作完成后進行滅菌處理，所有操作應該確保無菌操作．常用的固體培養(yǎng)基上的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法．
2、酵母菌在有氧和無氧的條件下都能生活：在有氧時，酵母菌大量繁殖，但是不起到發(fā)酵效果；在無氧時，繁殖速度減慢，但是此時可以進行發(fā)酵．
3、醋酸菌好氧性細菌，當缺少糖源時和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸；當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸．

解答 解：（1）①為了避免微生物的污染，用滅過菌的小鐵鏟、信封取該處土樣、并在火焰旁稱取10g土樣，加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中，充分搖勻．而后進行系列稀釋操作：吸取錐形瓶中土壤液的上清液1ml，轉移至盛有9ml無菌水的大試管中充分搖勻，依次等比稀釋，獲得稀釋至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀釋液．
②由于一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板進行計數(shù)，因此選擇“稀釋度10³倍”進行計算，每克土壤樣品中的酵母菌數(shù)量約=（178+191+156）÷3÷0.1×10³×10²÷10=1.75×10⁷個．要使該實驗所得數(shù)據(jù)可靠，還應該實施的操作是同時在各稀釋度組中，另加一個平板接種無菌水作為對照．
（2）酵母菌適宜生存的溫度為18～25℃，為去掉酵母菌，挑取變酸的柿子酒內(nèi)的菌膜（醋酸菌）于30〜35℃進行純化培養(yǎng)，獲得圖1所示菌落分布．丙中已形成單個菌落，因此需要從丙區(qū)域中挑取部分菌落制玻片觀察，選擇所需菌種．
（3）①排氣口彎管設置的目的是在酒精發(fā)酵時用來排出C0₂，防止空氣中微生物的污染．
②可通過裝置中的出料口對發(fā)酵情況進行及時監(jiān)測．此時，若采用血細胞計數(shù)板對發(fā)酵液的酵母菌觀察計數(shù)，與（1）中計數(shù)方法相比，該計數(shù)方法測得的酵母菌數(shù)目較多．
③柿子醋可在柿子酒生產(chǎn)的基礎上改變菌種和環(huán)境條件進行生產(chǎn)，即菌種由酵母菌改為醋酸菌，環(huán)境條件有無氧、18～25℃改為通入氧氣、30～35℃．
故答案為：
（1）①火焰   1   ②1.75×10⁷ 同時在各稀釋度組中，另加一個平板接種無菌水作為對照
（2）30〜35 丙
（3）①在酒精發(fā)酵時用來排出C0₂，防止空氣中微生物的污染
②出料口多
③菌種和環(huán)境條件

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)以及果酒、果醋的制作，要求考生掌握微生物分離與純化的方法，掌握果酒、果醋制作的原理以及不同的環(huán)境條件，再結合所學知識準確答題．