Question

14．內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽，它有強(qiáng)烈的血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用．研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系．內(nèi)皮素主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)．ET_A是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ET_A基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，為后期ET_A的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評(píng)價(jià)等奠定基礎(chǔ)．其過(guò)程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為C^↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C^↓TCGAG）．請(qǐng)分析回答：

（1）完成過(guò)程①需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶；與過(guò)程②相比，過(guò)程①特有的堿基配對(duì)方式是U-A．
（2）過(guò)程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開(kāi)，形成目的基因的黏性末端是-AGCT（或）．用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上．
（3）過(guò)程⑥中，要用Ca²⁺（或CaCl₂）預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．
（4）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（5）人皮膚黑色素細(xì)胞上有內(nèi)皮素的特異受體，內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，會(huì)刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加．美容時(shí)可以利用注射ET_A達(dá)到美白祛斑效果，這是因?yàn)镋T_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對(duì)黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成．

Answer 1

分析 分析圖形：123表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過(guò)程，4表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，5表示限制酶切割質(zhì)粒，6表示重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，7表示目的基因的檢測(cè)，以此分析答題

解答 解：（1）圖中1過(guò)程是逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；與過(guò)程2相比，該過(guò)程特有的堿基配對(duì)方式是U-A．
（2）過(guò)程3利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過(guò)程，限制酶使得DNA的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，形成的黏性末端是-AGCT（或）．圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，可以使目的基因定向連接到載體上．
（3）過(guò)程6重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程，要用Ca²⁺（或CaCl₂）預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．
（4）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可以檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（5）ET_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對(duì)黑色素細(xì)胞的增值和黑色素的形成，從而達(dá)到美容的目的．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄酶   U-A
（2）磷酸二酯-AGCT（或） 可以使目的基因定向連接到載體上
（3）Ca²⁺（或CaCl₂）
（4）檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量
（5）黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因香蕉形成的流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．