Question

【題目】胰島素樣生長因子－Ⅰ（IGF-Ⅰ）是一種活性蛋白多肽物質(zhì)，它是人體內(nèi)肝細胞、腎細胞、脾細胞等十幾種細胞分泌的產(chǎn)物。某研究小組利用原核細胞表達、純化IGF-Ⅰ，并制備其單克隆抗體�；卮鹣铝袉栴}：

（1）以人的肝組織中的總RNA處理得到的_______為模板，加入針對IGF-Ⅰ的特異引物（如下圖所示）進行PCR擴增，提取目的基因。正向引物中含有NdeⅠ酶的識別序列，逆向引物含有BamHⅠ酶的識別序列。已知NdeⅠ酶和BamHⅠ酶的識別序列均為6個核苷酸，則NdeⅠ酶和BamHⅠ酶的識別序列分別是________和_________。

正向引物為：5’-CGCATATGATGCACACCATGTCCTCCTC-3’

逆向引物為：5’-CGGGATCCCTACTTGCGTTCTTCAAATG-3’

（2）使用PCR擴增的目的基因構(gòu)建基因表達載體，并用該表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，通過純化獲取足量的IGF-Ⅰ。選擇大腸桿菌作為受體細胞的原因是_____________。

（3）用IGF-Ⅰ處理免疫小鼠，一段時間后，處死免疫小鼠，采集血清備用。取小鼠脾細胞與_______細胞進行細胞融合得到多種雜種細胞。除對這些雜種細胞進行選擇培養(yǎng)外，還需進行專一抗體檢驗。檢驗雜交瘤細胞的培養(yǎng)液時，需要進行對照實驗：以檢驗__________作為陽性對照，以檢驗_______________和_____________作為陰性對照。

Answer 1

【答案】 cDNA -CATATG- -GGATCC- 單細胞、繁殖快、遺傳物質(zhì)相對較少 骨髓瘤 免疫小鼠的血清 未免疫小鼠的血清 骨髓瘤細胞的培養(yǎng)液

【解析】【試題分析】

本題主要考查基因工程和制備單克隆抗體的相關(guān)知識。需要先梳理相關(guān)知識，再結(jié)合題意進行分析作答。限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一個中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復排列的，即呈回文序列。在制備單克隆抗體過程中，一般有兩次篩選過程，第一次是用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，第二次是通過克隆化培養(yǎng)和抗體檢測進一步篩選出能產(chǎn)生人們所需要抗體的雜交瘤細胞。據(jù)此答題。

（1）IGF-Ⅰ是人體內(nèi)肝細胞、腎細胞、脾細胞等十幾種細胞分泌的產(chǎn)物，所以可以從人的肝組織中的獲取總RNA進行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，再以該cDNA為模板，加入針對IGF-Ⅰ的特異引物（如下圖所示）進行PCR擴增，提取目的基因；限制性內(nèi)切酶識別DNA序列中的回文序列，據(jù)此可推知NdeⅠ酶的識別序列是-CATATG-，BamHⅠ酶的識別序列是-GGATCC-。

（2）大腸桿菌屬于原核生物，單細胞、繁殖快、遺傳物質(zhì)相對較少，因此常被用作基因工程的受體細胞。

（3）制備單克隆抗體時，首先取已免疫的小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合得到多種雜種細胞，然后對這些雜種細胞進行選擇培養(yǎng)，并且進行專一抗體檢驗；檢驗雜交瘤細胞的培養(yǎng)液時，需要進行對照實驗：以檢驗免疫小鼠的血清作為陽性對照，以檢驗未免疫小鼠的血清和骨髓瘤細胞的培養(yǎng)液作為陰性對照。