Question

【題目】科學(xué)家發(fā)現(xiàn)家蠅體內(nèi)存在一種抗腫瘤蛋白（且具有抗菌能力），受到研究者重視。臨床使用發(fā)現(xiàn)此蛋白質(zhì)對腫瘤確實有良好的療效，可以通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)進行大量生產(chǎn)。其過程大體如圖所示：

（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有___________________（至少寫出兩種）。

（2）圖中a過程叫_______________，它是基因操作的核心步驟，該過程中切質(zhì)粒和目的基因的限制酶可以不同，但是產(chǎn)生的粘性末端要滿足____________條件。

（3）將抗腫瘤基因?qū)�入大腸桿菌，并在大腸桿菌細胞內(nèi)成功表達產(chǎn)生了抗腫瘤蛋白，由于大腸桿菌具有__________________特點，因此在短時間內(nèi)就能獲得大量的抗腫瘤蛋白。

（4）細胞工程可以作為輔助手段，通過獲得特定的單克隆抗體并與抗腫瘤蛋白結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，以實現(xiàn)“靶向殺癌”。下面是單克隆抗體制備過程示意圖，請據(jù)圖回答：

① 圖中A過程從小鼠的脾臟中取得的“小鼠細胞”是___________細胞，要獲得能產(chǎn)生抗腫瘤蛋白抗體的雜交瘤細胞至少要經(jīng)過__________次篩選。從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，給小鼠注射的特定的物質(zhì)是____________________。

② 為檢測雜交瘤細胞是否成功的合成了單克隆抗體，可以采用____________的方法。

Answer 1

【答案】 鳥槍法、人工合成法 pCR 構(gòu)建基因表達載體 嚴(yán)格互補、繁殖快、代謝速度快 B 二 特異性的抗原 抗原抗體雜交

【解析】試題分析：基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成；基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等；將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導(dǎo)B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲取目的基因（鳥槍法）、PCR擴增目的基因、人工合成目的基因。

（2）圖中a表示構(gòu)建基因表達載體，是基因工程的核心步驟。該過程中切質(zhì)粒和目的基因的限制酶可以不同，但是產(chǎn)生的粘性末端要滿足嚴(yán)格互補的條件。

（3）選用大腸桿菌作為受體細胞，由于其繁殖速度快、產(chǎn)量較高，因此可以在短時間內(nèi)獲得要表達的蛋白質(zhì)。

（4）①單克隆抗體的制備過程中，采用的是已免疫的小鼠B細胞（漿細胞或效應(yīng)B細胞），即經(jīng)過注射特異性抗原，然后和骨髓瘤細胞的融合，需要經(jīng)過至少兩次篩選（第一次篩選獲得雜交瘤細胞，第二次篩選獲得能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細胞），最終篩選出來的雜交瘤細胞。

②為檢測雜交瘤細胞是否成功的合成了單克隆抗體，可以采用抗原抗體雜交的方法。