Question

【題目】科研人員利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其主要技術(shù)流程如圖，請回答下列問題：

（1）在獲取上皮細(xì)胞懸浮液的時(shí)候，通常要用胰蛋白酶而不用胃蛋白酶處理組織，原因是___________________________________________________________________。

（2）步驟①應(yīng)先對卵母細(xì)胞進(jìn)行______處理。由圖可知，步驟②要分離出ES細(xì)胞，需將重組胚胎培養(yǎng)到_____________期。

（3）步驟③選擇ES細(xì)胞作為受體細(xì)胞而不是上皮細(xì)胞，是因?yàn)?/span>ES細(xì)胞___________。該過程需要先利用_______技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因，其前提是要有一段已知干擾素基因的核苷酸序列以便合成_____________。

（4）步驟④將ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化成造血干細(xì)胞而不是其他細(xì)胞，其原因是_______________。

（5）為檢測干擾素基因是否在小鼠體內(nèi)成功表達(dá)，可以采用抗原——抗體雜交技術(shù)，其原理是____________________________________________。

Answer 1

【答案】細(xì)胞培養(yǎng)液的pH值接近中性，胰蛋白酶的最適pH值在7左右，而胃蛋白酶的最適pH值在2左右 去核 囊胚 在功能上具有發(fā)育的全能性 PCR 引物 造血干細(xì)胞能分化成產(chǎn)生干擾素的細(xì)胞（或T淋巴細(xì)胞） 抗體能和抗原特異性結(jié)合

【解析】

分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的流程，其中①表示獲得重組胚胎的過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。

（1）在獲取上皮細(xì)胞懸浮液的時(shí)候，由于細(xì)胞培養(yǎng)液的pH值接近中性，胰蛋白酶的最適pH值在7左右，而胃蛋白酶的最適pH值在2左右，因此通常要用胰蛋白酶而不用胃蛋白酶處理組織。

（2）根據(jù)圖示過程，步驟①表示通過核移植獲得重組胚胎的過程，因此應(yīng)先對卵母細(xì)胞進(jìn)行去核處理；由圖可知，步驟②要分離出ES細(xì)胞，需將重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期，從囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中可以分離出ES細(xì)胞。

（3）步驟③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，選擇ES細(xì)胞作為受體細(xì)胞而不是上皮細(xì)胞，是因?yàn)?/span>ES細(xì)胞在功能上具有發(fā)育的全能性；擴(kuò)增目的基因（干擾素）一般采用PCR技術(shù)，而應(yīng)用PCR技術(shù)的前提是要有一段已知干擾素基因的核苷酸序列以便合成引物。

（4）干擾素由T細(xì)胞分泌，根據(jù)淋巴細(xì)胞的起源與分化過程，步驟④中之所以將ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化成造血干細(xì)胞，是因?yàn)樵煅�干�?xì)胞能分化成產(chǎn)生干擾素的細(xì)胞（或T淋巴細(xì)胞）。

（5）在基因工程操作中檢測目的是否表達(dá)時(shí)，可以采用抗原——抗體雜交法，其原理為：利用目的基因的表達(dá)產(chǎn)物作為抗原獲得抗體，再利用抗體能和抗原特異性結(jié)合的特性，進(jìn)而檢測受體細(xì)胞中目的基因是否表達(dá)。