Question

【題目】嗜熱鏈球菌屬于一種乳酸菌。分離出優(yōu)質(zhì)的嗜熱鏈球菌是酸奶工業(yè)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，以下是嗜熱鏈球菌的有關(guān)分離純化與鑒定過(guò)程，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題。

第一步：從國(guó)家乳業(yè)技術(shù)中心獲得混合發(fā)酵劑（含多種乳酸菌），用無(wú)菌生理鹽水梯度稀釋。

第二步：取等量不同稀釋度的菌液分別接種于Elliker培養(yǎng)基，在相同且適宜條件下培養(yǎng)。

第三步：選取疑似菌落分別穿刺接種于ABC三種糖發(fā)酵半固體培養(yǎng)基（成分及現(xiàn)象如下表）中培養(yǎng)，進(jìn)一步進(jìn)行生化鑒定。

成分（g）	胰蛋白胨	牛肉膏	葡萄糖	蔗糖	麥芽糖	溴甲酚紫	NaCl	瓊脂	現(xiàn)象
A培養(yǎng)基	10	3.0	5.0	無(wú)	無(wú)	0.04	5.0	5.0	紫色變?yōu)辄S色
B培養(yǎng)基			無(wú)	5.0	無(wú)				紫色變?yōu)辄S色
C培養(yǎng)基			無(wú)	無(wú)	5.0				不變色
說(shuō)明	1.溴甲酚紫是一種酸堿指示劑，在中性時(shí)為紫色，堿性時(shí)為深紅色，而在酸性時(shí)呈現(xiàn)黃色。 2.將上述成分溶解，pH調(diào)為7，用蒸餾水定容至1000mL；

第四步：將生化鑒定為嗜熱鏈球菌的疑似菌落進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)并保存。

（1）第一步中稀釋的目的是______________________。

（2）在第二步中，利用的接種方法是____________，可根據(jù)菌落__________特征來(lái)選取疑似菌落。（寫出兩點(diǎn)）

（3）第三步中，如果接種的疑似菌落確實(shí)是嗜熱鏈球菌，根據(jù)生化鑒定現(xiàn)象歸納其代謝特點(diǎn)為：利用___（葡萄糖/蔗糖/麥芽糖）作為主要碳源，并可以經(jīng)_____（無(wú)氧/有氧）呼吸的方式分解底物，且在代謝產(chǎn)物中一定有____（酸/堿/中）性產(chǎn)物產(chǎn)生。NaCl的主要作用是_________。

（4）第四步中，如果要長(zhǎng)期保存分離出的菌種常采用___________________的方法，并將其置于_____ ℃ 冷凍箱中保存。

Answer 1

【答案】便于形成單菌落，利于微生物的分離純化(將細(xì)胞分散，便于形成單菌落） 稀釋涂布平板法 形狀、大小、隆起程度、顏色、凸起等 葡萄糖和蔗糖 無(wú)氧 酸 維持正常的滲透壓、提供無(wú)機(jī)鹽 甘油管藏 -20

【解析】

本題涉及微生物的培養(yǎng)與分離，考查對(duì)培養(yǎng)基成分、接種方法、菌種保存方法的理解和識(shí)記。乳酸菌在代謝中可產(chǎn)生乳酸，使培養(yǎng)基表現(xiàn)為酸性，結(jié)合表中實(shí)驗(yàn)結(jié)果可判斷嗜熱鏈球菌的主要碳源，根據(jù)穿刺接種方法可判斷其異化作用方式。

（1）第一步中稀釋的目的是降低菌體密度，以便于在固體培養(yǎng)基上形成單菌落，利于微生物的分離純化。

（2）在第二步中，取不同稀釋度的菌液接種，應(yīng)采用稀釋涂布平板法，不同菌種的菌落形狀、大小、隆起程度、顏色、凸起等特征不同，據(jù)此可選取目的菌的菌落。

（3）第三步中，如果接種的疑似菌落確實(shí)是嗜熱鏈球菌，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，培養(yǎng)基中含有葡萄糖或蔗糖時(shí)，培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，說(shuō)明嗜熱鏈球菌利用葡萄糖或蔗糖作為主要碳源，且在代謝產(chǎn)物中一定有酸性產(chǎn)物產(chǎn)生；接種時(shí)采用穿刺接種，避免菌種接種氧氣，說(shuō)明嗜熱鏈球菌經(jīng)無(wú)氧呼吸的方式分解底物，NaCl作為無(wú)機(jī)鹽，可以維持培養(yǎng)基正常的滲透壓，維持菌體正常的生命活動(dòng)。

（4）甘油在菌種冷凍保存時(shí)作為保護(hù)劑及防凍劑，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。長(zhǎng)期保存分離出菌種常采用甘油管藏的方法，并將其置于-20℃冷凍箱中保存，以降低其代謝速率。

比較項(xiàng)目	平板劃線法	稀釋涂布平板法
關(guān)鍵操作	接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線	一系列的梯度稀釋；涂布平板法操作
注意事項(xiàng)	每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)	稀釋度需足夠高，為確保實(shí)驗(yàn)成功可以增加稀釋度的范圍
菌體獲取	在具有顯著菌落特征的區(qū)域的菌落中跳去菌體	從適宜稀釋濃度的平板上的菌落中跳去菌體
優(yōu)點(diǎn)	可以根據(jù)菌落特征獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落	既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)
缺點(diǎn)	不能對(duì)微生物計(jì)數(shù)	操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板