Question

【題目】大腸桿菌是人和動物腸道中普遍存在的一種兼性厭氧菌，在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉變?yōu)槎喾N有機酸并產生 CO2 等氣體。某研究機構使用“濾膜法”對受污染的河流水體進行了大腸桿菌活菌數目的測定。請回答：

(1)研究人員向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍水溶液后，裝入右圖所示的試管中，再將污水水樣滴加進去震蕩均勻，適宜條件下培養(yǎng)一段時間后可觀察到溶液顏色的變化為由藍變綠再變黃， 并且在倒置的小管中出現__________。

(2)測定大腸桿菌活菌數目時，需制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中為細菌提供氮源的物質是___________________。為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入________________作為指示劑。

(3)為了便于統(tǒng)計污染嚴重的水體中活菌的數目，需將水樣進行適當稀釋，例如取水樣 1ml 加入無菌水______ml 制備稀釋倍數為101 的稀釋液，并照此依次制備更高倍數的稀釋液。每個稀釋倍數的菌液取 10ml 進行過濾，然后將濾膜放置在培養(yǎng)基上。為了防止雜菌污染，稀釋、過濾和放置濾膜等操作都應該在________附近進行。

(4)將放有濾膜的平板置于適宜條件下培養(yǎng)，每隔 12 h 統(tǒng)計一次菌落的數目，應選取菌落數目________時的記錄作為結果。如果經過培養(yǎng)后，稀釋倍數為 102 的 4 個平板上菌落 數分別為 43、47、42、48(四個平板上接種的稀釋液均為 0.1ml )，那么每升河水中約含有大腸桿菌___________個，用這種方法測定的細菌數量要比實際活菌數量要少，這是因為________________________________________________________________。

Answer 1

【答案】氣泡 牛肉膏和蛋白胨 伊紅美藍 9 酒精燈火焰 穩(wěn)定 4.5×107 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到是一個菌落

【解析】

二氧化碳可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃。培養(yǎng)各種微生物的培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和無機鹽。伊紅為酸性染料，美藍為堿性染料，大腸桿菌在含有伊紅美藍培養(yǎng)基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金屬光澤，伊紅美藍是專一鑒別大腸桿菌的指示劑。常用的純化微生物時的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。

稀釋涂布平板法能用于微生物的計數，其計算公式為：1毫升（克）樣品中的菌株數=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（毫升），M代表稀釋倍數；用稀釋涂布平板法對微生物計數往往比活菌的實際數目低，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落。

（1）由題干“在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉變?yōu)槎喾N有機酸并產生CO2等氣體”，向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍培養(yǎng)一段時間的大腸桿菌，可產生CO2氣體，CO2可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃，并且在倒置的小管中出現氣泡。

（2）用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌時，培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨能為細菌提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素；伊紅美藍是專一鑒別大腸桿菌的指示劑，為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍作為指示劑。

（3）用稀釋涂布平板法進行對微生物計數時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品大約含有多少活菌，若將水樣稀釋101倍，可取水樣1mL加入到9mL的無菌水中進行稀釋；為了防止雜菌污染，整個操作過程應進行無菌操作，所以在稀釋、過濾和旋轉濾膜等操作時都應該在酒精燈火焰附近進行。

（4）統(tǒng)計培養(yǎng)的菌落數目時應選取菌落數目穩(wěn)定時的記錄作為結果，如果經過培養(yǎng)后稀釋倍數為102的4個平板上菌落數分別為43、47、42、48，則平板上平均菌落數=（43+47+42+48）÷4=45個，每毫升河水中約含大腸桿菌數=（C÷V）×M=（45÷0.1）×102=4.5×104個，每升河水中約含大腸桿菌數=4.5×104×103=4.5×107個；用稀釋涂布平板法測定的細菌數量比實際活菌數量要少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落。