Question

下列是基因工程的有關(guān)問題，請回答：
（1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的

 

（填化學(xué)鍵名稱）斷裂，形成的末端總體可分為兩種類型，分別是

 

．
（2）目的基因和運(yùn)載體重組時需要的工具酶是

 

，和限制性核酸內(nèi)切酶相比，它對所重組的DNA兩端堿基序列

 

（有或無）專一性要求．
（3）圖1表示構(gòu)建表達(dá)載體時的某種質(zhì)粒與目的基因．已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點(diǎn)是-G↓CATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點(diǎn)是一↓GATC-．

分析可知，最好選擇限制酶

 

切割質(zhì)粒，限制酶

 

切割目的基因所在的DNA，這樣做的好處分別是

 

、

 

．
（4）人的膚色正常與白化病受常染色體上基因A和a控制．若白化病基因與相對應(yīng)的正�；�因相比，白化病基因缺失了一個限制酶的切點(diǎn)，甲、乙、丙3人白化基因或相對應(yīng)正�；�因的核酸分子雜交診斷結(jié)果如圖2．
由圖2可以判斷出，乙和丙的基因型分別是

 

、

 

．如果甲與丙婚配，后代患病的概率為

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）
（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的．
（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．
（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．
2、DNA連接酶
（1）根據(jù)酶的來源不同分為兩類：E．coliDNA連接酶、T₄DNA連接酶．
這二者都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低．
（2）DNA連接酶連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．

解答： 解：（1）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．
（2）目的基因和運(yùn)載體重組時需要DNA連接酶連接兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．它對所重組的DNA兩端堿基序列無專一性．
（3）圖1中顯示，已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點(diǎn)是-G↓CATCC-，酶Ⅰ切割質(zhì)粒不會把兩個標(biāo)記基因都破壞，最好選擇限制酶I切割質(zhì)粒．限制酶Ⅱ的識別序列和切點(diǎn)是一↓GATC-，目的基因兩端均有酶Ⅱ的識別序列，限制酶II切割目的基因所在的DNA．
（4）由圖2可以判斷出，甲、乙和丙的基因型分別是Aa、AA、aa．如果甲與丙婚配，后代患病的概率為

1

2

故答案為：
（1）磷酸二酯鍵   粘性末端和平末端
 （2）DNA連接酶  無
（3）酶Ⅰ酶Ⅱ酶Ⅰ切割質(zhì)粒不會把兩個標(biāo)記基因都破壞     目的基因兩端均有酶Ⅱ的識別序列
（4）AA   aa   1/2

點(diǎn)評：本題著重考查了基因工程原理和技術(shù)的有關(guān)知識，意在考查考生能識記并理解所學(xué)知識的要點(diǎn)，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成一定知識網(wǎng)絡(luò)的能力，并且具有一定的分析能力和理解能力．