Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列．現有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．請回答下列問題：

（1）基因工程的核心步驟是______________。

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是__末端。

（3）若圖1中虛線方框內的堿基對被T﹣A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d．從雜合子分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產物中共有__種不同DNA片段．

（4）在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加__的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)．

（5）啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，它是__識別與結合的位點，促進轉錄的開始．

Answer 1

【答案】基因表達載體的構建 平 4 抗生素B RNA聚合酶

【解析】

根據題干信息和圖形分析可知，外源DNA含有MspⅠ、BamHI、MboI、SmaI4種限制性核酸內切酶的識別序列，其中限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點在目的基因D上；質粒含有MspⅠ、MspI、BamHI、MboI4種限制性核酸內切酶的識別序列，其中BamHI酶的切割位點位于抗生素A的抗性基因上；MboI酶的切割位點位于抗生素B和抗生素A的抗性基因上。

（1）基因表達載體的構建是基因工程的核心步驟。

（2）SmaⅠ識別和切割位點是CCC↓GGG，因此若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是平末端。

（3）根據題意分析，雜合子的基因型為Dd，其中D基因片段有兩個SmaⅠ酶切位點，完全切割后出現三個片段長度分別是534+3=537bp、796-3-3=790bp、658+3=661bp，發(fā)生基因突變后的d基因片段只有一個SmaⅠ酶切位點，完全切割后出現兩個片段長度分別是1327bp、661bp，所以從雜合子中分離的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后形成會四種不同的DNA片段。

（4）用限制酶BamHⅠ切割質粒會破壞抗生素A抗性基因，但不會破壞抗生素B抗性基因，所以導入重組質粒的大腸桿菌能在含有抗生素B的培養(yǎng)基上生存，因此為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加抗生素B的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

（5）基因表達載體上的啟動子是RNA聚合酶的結合位點。