Question

【題目】為了解決番木瓜環(huán)斑病毒引起番木瓜產(chǎn)量下降問題，我國研發(fā)了抗番木瓜環(huán)斑病毒轉基因番木瓜品種。下圖表示該抗番木瓜環(huán)斑病毒轉基因番木瓜的主要培育流程，請回答下列問題：

（1）番木瓜環(huán)斑病毒是一種變異性很強的RNA病毒。要想獲得番木瓜環(huán)斑病毒復制酶基因，可先將番木瓜環(huán)斑病毒的RNA經(jīng)過__________形成cDNA，再利用__________切割獲得的雙鏈cDNA來獲取該病毒復制酶基因。

（2）在過程①的操作中，需要將番木瓜環(huán)斑病毒復制酶基因插入Ti質粒的__________，其原因是____________。在過程②的操作中，將重組Ti質粒轉入大腸桿菌的目的是__________。

（3）給番木瓜細胞轉入外來基因，成功的概率是很低的，可采用__________技術來檢測愈傷組織中是否導入了外來基因。圖中過程④和⑤中芽和根的分化與__________（填激素名稱）有關。

Answer 1

【答案】逆轉錄 限制酶 T-DNA T-DNA可攜帶目的基因進入受體細胞，并整合到受體細胞的染色體 DNA上 大量復制目的基因 DNA分子雜交 生長素和細胞分裂素

【解析】

（1）考查基因工程育種的過程。圖示過程中①為獲得重組DNA的過程，該過程中需要限制酶和DNA連接酶、②為導入受體細胞的過程、③為將含有目的基因的番木瓜細胞進行組培的過程，表示其中的脫分化、④為再分化生出芽的過程、⑤為再分化生出根的過程。④與⑤的分化方向與培養(yǎng)基中生長素和細胞分裂素的比例有關。

（2）在分子水平上的檢測目的基因有三種方法：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA——分子雜交技術，即C選項；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質——抗原—抗體雜交技術。

（1）因為番木瓜環(huán)斑病毒是一種RNA病毒。要想獲得番木瓜環(huán)斑病毒復制酶基因，需先將番木瓜環(huán)斑病毒的RNA經(jīng)過逆轉錄過程形成cDNA，再利用限制酶切割獲得的雙鏈cDNA來獲取該病毒復制酶基因。

（2）在過程①的操作中，因為Ti質粒的T-DNA是可轉移的DNA 所以需要將番木瓜環(huán)斑病毒復制酶基因插入其中，進而T-DNA可攜帶目的基因進入受體細胞，并整合到受體細胞的染色體 DNA上。因為大腸桿菌經(jīng)常作為工程菌且易培養(yǎng)故在過程②的操作中，將重組Ti質粒轉入大腸桿菌的目的是為了獲得大量的目的基因，以便為后續(xù)的工作提供基礎。

（3）據(jù)分析知：本題中檢測目的基因是否成功導入采用DNA分子雜交技術來檢測。過程④和⑤中芽和根的分化與生長素和細胞分裂素有關。