Question

如圖為綠色熒光小鼠制備流程圖，Gfp是綠色熒光蛋白基因，請(qǐng)分析回答：

（1）構(gòu)建表達(dá)載體需要的酶是：

 

，表達(dá)載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、

 

、

 

、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等．
（2）圖中載體上的NEO基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是一種抗生素（對(duì)細(xì)胞有毒害作用），添加G418的目的是

 

．
（3）圖中所用的胚胎干細(xì)胞來自于

 

．
（4）圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的

 

位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是

 

．
（5）可以使用

 

方法在蛋白質(zhì)水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),胚胎干細(xì)胞的來源及分化

專題：

分析：分析題圖：圖示為綠色熒光小鼠制備流程圖，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；②表示將表達(dá)載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞；③表示胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng)過程；④表示沖卵，即沖出胚胎的過程；⑤表示將胚胎干細(xì)胞團(tuán)注入囊胚；⑥表示胚胎移植過程．

解答： 解：（1）構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和運(yùn)載體，還需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒；表達(dá)載體包含目的基因（綠色熒光蛋白基因Gfp）、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等．
（2）步驟③所用的G418是一種抗生素，其作用是篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞．
（3）胚胎干細(xì)胞來自于早期胚胎或原始性腺．
（4）囊胚包括滋養(yǎng)層細(xì)胞和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞，其中滋養(yǎng)層細(xì)胞將發(fā)育成胎盤和胎膜，而內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞將發(fā)育成各種組織，因此圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)位置；圖中步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是同期發(fā)情處理．
（5）從分子水平上檢測小鼠是否存在綠色熒光蛋白，可采用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶      標(biāo)記基因      啟動(dòng)子
（2）篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞
（3）早期胚胎或原始性腺
（4）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)       同期發(fā)情處理
（5）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合綠色熒光小鼠制備流程圖，考查基因工程、胚胎干細(xì)胞、胚胎移植等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟；識(shí)記胚胎干細(xì)胞的概念及來源；識(shí)記胚胎移植的過程，能結(jié)合圖中信息答題．