Question

14．研究表明，HER2/neu是一種原癌基因，它表達的H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細胞中過量表達．抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達H蛋白的乳腺癌細胞的生長，目前已成為有效的生物治療手段．
（1）選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點，是因為H蛋白在成年個體的正常組織中低表達（填“低表達”或“高表達”）．H蛋白是一個跨膜蛋白，結構如圖12所示．制備免疫小鼠用的H蛋白（抗原）時，應構建胞外區(qū)基因，轉入原核細胞表達并提純．
（2）將H蛋白注射到小鼠體內，取該小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤細胞進行融合，使用的化學誘導劑是PEG（或“聚乙二醇”），細胞融合的原理是細胞膜的流動性．
（3）將融合細胞在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后培養(yǎng)基中只有雜交瘤細胞生長．將雜交瘤細胞轉到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，吸取有克隆生長的細胞培養(yǎng)孔中的上清液（填“上清液”或“沉淀細胞”），應用抗原-抗體雜交技術進行抗體陽性檢測．經(jīng)多次篩選，就能得到產生單克隆抗體的雜交瘤細胞．
（4）將篩選得到的雜交瘤細胞，經(jīng)過體外（培養(yǎng)）或小鼠腹腔內培養(yǎng)，獲取大量的單克隆抗體．
（5）治療乳腺癌時，可單獨使用抗H蛋白單克隆抗體，也可將該單克隆抗體與抗癌藥物結合構建“生物導彈”，殺死癌細胞．這充分體現(xiàn)了單克隆抗體特異性強（或“識別抗原部位專一”）的特點．

Answer 1

分析 單克隆抗體的制備過程是：對小動物注射抗原，從該動物的脾臟中獲取效應B細胞，將效應B細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選出能產生單一抗體的雜交瘤細胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細胞（體內培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體．
誘導動物細胞融合的方法有：物理法（離心、振動）、化學法（聚乙二醇）、生物法（滅活的病毒）．

解答 解：（1）根據(jù)題意可知，H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細胞中過量表達，因此原癌基因的表達產物H蛋白在正常組織中低表達；由于抗體主要存在于細胞外液中，因此根據(jù)H蛋白的結構圖可知，若用H蛋白制備抗原需要利用胞外區(qū)基因，由制備獲得的抗體作用于該抗原的胞外區(qū)．
（2）在制備單克隆抗體過程中，需要將脾臟細胞與骨髓瘤細胞融合，誘導其融合的試劑為聚乙二醇，其融合的原理是借助于細胞膜的流動性．
（3）將融合細胞接種在選擇培養(yǎng)基中，從中選出雜交瘤細胞，由于抗體蛋白質相對質量較輕，又因為抗體由細胞分泌出細胞，因此需要在吸取有克隆生長的細胞培養(yǎng)孔中的上清液，利用抗原-抗體雜交技術最后選出產生單克隆抗體的雜交瘤細胞．
（4）將雜交瘤細胞經(jīng)過體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內培養(yǎng)，獲得大量的單克隆抗體．
（5）單克隆抗體的優(yōu)點是特異性強，靈敏度高．
故答案為：
（1）低表達   胞外
（2）骨髓瘤     PEG（或“聚乙二醇”）  細胞膜的流動性
（3）選擇   上清液   抗原-抗體雜交
（4）體外（培養(yǎng)）
（5）特異性強（或“識別抗原部位專一”）

點評 本題結合抑制癌癥的材料考查了單克隆抗體的相關知識，要求考生能夠從題干和題圖中獲取有效解題信息；識記單克隆抗體的制備過程以及細胞融合的誘導技術，識記單克隆抗體的優(yōu)點等方面的知識．