小鼠是實驗室常用的實驗動物,如:利用小鼠制備抗X病毒單克隆抗體、利用小鼠進行DNA重組研究中導(dǎo)致了“基因敲除”技術(shù)的出現(xiàn).
Ⅰ用小鼠制備抗X病毒單克隆抗體.
(1)取一定數(shù)量的小鼠,定期間隔給它們注射適量的含X病毒的溶液,其目的是
.
(2)一段時間后,取小鼠脾臟中的相應(yīng)細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合,細胞能夠融合的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是
.融合時常用的化學(xué)試劑是
融合后形成的兩兩融合細胞有
種類型.我們需要的雜交瘤細胞的特點是
.
(3)為了保存有價值的雜交瘤細胞系,通常用超低溫將其凍存,試分析其原因
.
Ⅱ、用小鼠進行DNA重組研究中形成的“基因敲除”技術(shù),能“敲除”DNA分子上的特定基因.該技術(shù)的主要過程如下:
第一步:分離小鼠胚胎干細胞,這些細胞中含有需要改造的基因,稱“靶基因”.
第二步:獲取與“靶基因”同源的DNA片斷,利用特定技術(shù)在該DNA片段上插入neo
R基因(新霉素抗性基因)成為突變DNA(如下圖),使該片段上的靶基因失活.
第三步:將插入neo
R基因(新霉索抗性基因)的靶基因轉(zhuǎn)移入胚胎干細胞,再通過同源互換,用失活靶基因取代兩個正常靶基因中的一個,完成對胚胎干細胞的基因改造.
第四步:將第三步處理后的胚胎干細胞,轉(zhuǎn)移到特定培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng).
其基本原理如圖所示:
(4)該技術(shù)采用胚胎干細胞作為轉(zhuǎn)入對象是因為胚胎干細胞具有
性.第二步中ne08基因插入靶基因使用的工具酶是
.neo
R基因不僅能使靶基因失活,還是
;“靶基因失活”的含義是
.第三步中,涉及的變異類型是
(5)從研究者成功獲得如上圖所示的“敲除”一個靶基因的胚胎干細胞,到將該細胞培育成“基因敲除”小鼠,運用到的生物技術(shù)有
、
等.
(6)科學(xué)家可以通過“基因敲除”來研究基因的功能,(5)小題中獲得的基因敲除小鼠,
(能/不能)直接用來研究基因功能,原因是
.