Question

18．由于人突變細(xì)胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常細(xì)胞中含HGPRT酶而缺乏TK，兩種細(xì)胞均不能在HAT培養(yǎng)基中生長，但可在普通培養(yǎng)基中生長．利用上述兩類細(xì)胞融合獲得雜種細(xì)胞，在雜種細(xì)胞傳代過程中，鼠的染色體被保留下來，人的染色體隨機(jī)丟失，以至最后只剩一條或幾條人染色體（如圖，圖中數(shù)字代表保留的人染色體編號(hào)）．科研人員運(yùn)用這一方法確定了胸苷激酶基因所在的染色體．分析回答：

（1）與植物原生質(zhì)融合過程相比，過程A特有的誘導(dǎo)方法是用滅活的病毒處理．
（2）動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養(yǎng)箱中充入5…的CO₂氣體的主要作用是維持培養(yǎng)液適宜的pH．
（3）若細(xì)胞兩兩融合，則會(huì)出現(xiàn)3種類型的融合細(xì)胞，過程B用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，其目的是篩選出人鼠融合細(xì)胞（或“雜種細(xì)胞”）．
（4）為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細(xì)胞中，人鼠融合細(xì)胞應(yīng)在普通（填“HAT”或“普通”）培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)．為檢查雜種細(xì)胞中含有的人染色體數(shù)目和形態(tài)，最好選取有絲分裂中期（時(shí)期）的雜種細(xì)胞進(jìn)行觀察．
（5）若將某次實(shí)驗(yàn)獲得的各種人鼠雜種細(xì)胞分別在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細(xì)胞能夠生長，檢查雜種細(xì)胞中保留的人染色=體情況如下表（表中“+”表示有相應(yīng)染色體，“-”表示無相應(yīng)染色體）：

雜種細(xì)胞	保留的人染色體
	2號(hào)	3號(hào)	5號(hào)	9號(hào)	12號(hào)	17號(hào)	21號(hào)
A	+	+	+	+	-	+	-
B	-	+	-	-	+	+	-
C	+	-	+	-	+	+	+

根據(jù)表中信息，可推測人細(xì)胞中胸苷激酶基因位于17號(hào)染色體上．

Answer 1

分析 1、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較：

項(xiàng)目	細(xì)胞融合原理	細(xì)胞融合方法	誘導(dǎo)手段	用途
植物體細(xì)胞雜交	細(xì)胞膜的流動(dòng)性，（細(xì)胞的全能性）	去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合	離心、電刺激、聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)	克服遠(yuǎn)緣雜交不親和，獲得雜交植株
動(dòng)物細(xì)胞融合	細(xì)胞膜的流動(dòng)性	使細(xì)胞分散后，誘導(dǎo)細(xì)胞融合	離心、電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導(dǎo)	制備單克隆抗體的技術(shù)之一

2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．
3、分析表格：A、B、C三種雜種細(xì)胞共有的染色體是17號(hào)染色體．

解答 解：（1）植物原生質(zhì)體融合的誘導(dǎo)方法有物理法和化學(xué)法，而誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有物理法、化學(xué)法和生物法，因此與植物原生質(zhì)體融合過程相比，過程A特有的誘導(dǎo)方法是生物法，即用滅活的病毒處理．
（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養(yǎng)箱中充入5%的CO₂氣體的主要作用是維持培養(yǎng)液適宜的pH．
（3）若細(xì)胞兩兩融合，則會(huì)出現(xiàn)3種類型的融合細(xì)胞，即人細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、小鼠細(xì)胞自身融合的細(xì)胞和人鼠細(xì)胞融合形成的雜種細(xì)胞；過程B用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，目的是篩選出人鼠融合細(xì)胞（雜種細(xì)胞）．
（4）突變細(xì)胞和正常細(xì)胞都不能在HAT培養(yǎng)基上生長，但都能在普通培養(yǎng)基上生長，因此為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細(xì)胞中，人鼠融合細(xì)胞應(yīng)在普通培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)．有絲分裂中期，細(xì)胞中染色體形態(tài)穩(wěn)定、數(shù)目清晰，是觀察染色體形態(tài)和數(shù)目的最佳時(shí)期．
（5）在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細(xì)胞能夠生長，而A、B、C三種雜種細(xì)胞共有的染色體是17號(hào)染色體，據(jù)此可推知人細(xì)胞中胸苷激酶基因位于17號(hào)染色體上．
故答案為：
（1）用滅活的病毒處理
（2）防止雜菌污染    維持培養(yǎng)液適宜的pH
（3）3    篩選出人鼠融合細(xì)胞（或“雜種細(xì)胞”）
（4）普通   有絲分裂中期
（5）17

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖表，考查動(dòng)物細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，能對(duì)動(dòng)植物細(xì)胞融合進(jìn)行比較；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，能結(jié)合圖表中信息準(zhǔn)確答題．