Question

20．如圖所示，質(zhì)粒PBR322上含有青霉素抗性基因（X^R）和四環(huán)素抗性基因（Y^R）．其中，X^R內(nèi)部含有限制酶KasI識(shí)別序列，Y^R內(nèi)部含有限制酶FseI、HpaII、
NaeI、NgoMIV識(shí)別序列，且這些識(shí)別序列在整個(gè)質(zhì)粒上均僅有一處，目的基因內(nèi)部不存在這些識(shí)別序列．
（1）質(zhì)粒PBR322的本質(zhì)是閉環(huán)雙鏈DNA．
FseI、HpaII、NaeI、NgoMIV中限制酶的作用特點(diǎn)是識(shí)別DNA特定的序列并在特定位點(diǎn)切割．
（2）NaeI酶切目的基因和質(zhì)粒，加入DNA連接酶連接后，進(jìn)行大腸桿菌受體細(xì)胞導(dǎo)入操作．之后，受體細(xì)胞的類型包含ABD（多選）
A．抗青霉素、抗四環(huán)素         B．抗青霉素、不抗四環(huán)素
C．不抗青霉素、抗四環(huán)素        D．不抗青霉素、不抗四環(huán)素
（3）若用KasI和FseI聯(lián)合酶切上述重組質(zhì)粒，則可能產(chǎn)生的酶切片段數(shù)A．
A.2             B．3            C．4              D．5
（4）動(dòng)物基因工程通常以受精卵作為受體細(xì)胞的根本原因是B．
A．受精卵能使目的基因高效表達(dá)B．受精卵可發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體
C．受精卵基因組更易接受DNA的插入D．受精卵尺寸較大，便于DNA導(dǎo)入操作
（5）若目的基因模板鏈中的TGA序列對(duì)應(yīng)1個(gè)密碼子，翻譯時(shí)識(shí)別該密碼子的tRNA上相應(yīng)的堿基序列是UGA．通過篩選出的受體細(xì)胞內(nèi)，目的基因能成功表達(dá)的原因是生物界共用一套遺傳密碼子．

Answer 1

分析 分析題圖：質(zhì)粒PBR322上含有青霉素抗性基因（X^R）和四環(huán)素抗性基因（Y^R），其中X^R內(nèi)部含有限制酶KasⅠ識(shí)別序列，Y^R內(nèi)部含有限制酶FseⅠ、HpaⅡ、NaeⅠ、NgoMⅣ識(shí)別序列，五種酶的識(shí)別序列在整個(gè)質(zhì)粒上均僅有一處，目的基因內(nèi)部不存在這些識(shí)別序列．由于限制酶具有特異性，因此用KasⅠ和FseⅠ聯(lián)合酶切重組質(zhì)粒，KasⅠ在X^R可以切開一個(gè)位點(diǎn)、FseⅠ在Y^R也可以切開一個(gè)位點(diǎn)，這樣只能得到2段DNA片段．

解答 解：（1）質(zhì)粒的本質(zhì)是雙鏈環(huán)狀DNA分子．由于限制酶具有特異性，只能識(shí)別DNA特定的序列并在特定位點(diǎn)切割．
（2）將圖中切開的質(zhì)粒與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，可能有以下三種情況：
①質(zhì)粒自身環(huán)化或質(zhì)粒與質(zhì)粒結(jié)合，將它們導(dǎo)入受體細(xì)胞后，由于X^R、Y^R基因都沒有被破壞，因此表現(xiàn)為X^R、Y^R，A正確；
②有的質(zhì)粒與目的基因連接形成重組質(zhì)粒，這種重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞后，由于Y^R基因被破壞，只有X^R抗性，表現(xiàn)為X^R、Y^S，B正確；
③目的基因自身環(huán)化或目的基因與目的基因結(jié)合，將它們導(dǎo)入受體細(xì)胞后，由于沒有抗性基因，因此表現(xiàn)為X^S、Y^S，D正確．
故選：ABD．
（3）根據(jù)題意，X^R內(nèi)部含有限制酶KasⅠ識(shí)別序列，Y^R內(nèi)部含有限制酶FseⅠ、HpaⅡ、NaeⅠ、NgoMⅣ識(shí)別序列，五種酶的識(shí)別序列在整個(gè)質(zhì)粒上均僅有一處，目的基因內(nèi)部不存在這些識(shí)別序列．因此用KasⅠ和FseⅠ聯(lián)合酶切重組質(zhì)粒，KasⅠ在X^R可以切開一個(gè)位點(diǎn)、FseⅠ在Y^R也可以切開一個(gè)位點(diǎn)，這樣只能得到2段DNA片段，故選A．
（4）因?yàn)槭芫�卵的全能性高，可以發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體，因此，動(dòng)物基因工程通常以受精卵作為受體細(xì)胞．故選：B．
（5）根據(jù)堿基配對(duì)原則，TGA序列對(duì)應(yīng)的密碼子是ACU，密碼子ACU對(duì)應(yīng)的tRNA上的反密碼子是UGA．所有的生物都共用一套密碼子，所以目的基因能成功表達(dá)能藻受體細(xì)胞中成功表達(dá)．
故答案為：
（1）閉環(huán)雙鏈DNA    識(shí)別DNA特定的序列并在特定位點(diǎn)切割
（2）ABD
（3）A
（4）B
（5）UGA　　　　生物界共用一套遺傳密碼子

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；能結(jié)合圖中和題中信息準(zhǔn)確答題，有一定難度，屬于考綱理解和應(yīng)用層次的考查．