Question

12．我國目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質（S蛋白，對應的基因為S基因），請回答下列問題．
（1）在這項技術中，S基因屬于目的基因．
（2）用同一種限制酶處理S基因和運載體，并用DNA連接酶使之結合，這里的DNA片段兩兩結合的產物有3種，除了S基因，構建好的表達載體還應具有啟動子、終止子、標記基因等結構．
（3）將表達載體導入哺乳動物細胞，篩選得到工程細胞．使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)工程細胞時，通常需要加入動物血清等天然成分．工程細胞在生長過程中有貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，以便于分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中，定期收集培養(yǎng)液，分離純化即可得到所需產品．

Answer 1

分析 DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
由于基因的選擇性表達，在利用轉基因動物生產藥物時，要將藥用蛋白基因和乳腺組織特異性表達的啟動子等調控組件重組在一起．
動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質．
動物細胞培養(yǎng)關鍵詞辨析：
1、細胞貼壁：培養(yǎng)時，懸液中的細胞會很快貼附在瓶壁上．
2、細胞的接觸抑制：細胞表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖．（癌細胞無接觸抑制）

解答 解：（1）在基因工程技術中，S基因屬于目的基因．
（2）在基因表達載體構建的過程中，要用同一種限制酶處理S基因和運載體，并用DNA連接酶使之結合．由于目的基因和運載體均具有相同黏性末端，因此這里的DNA片段兩兩結合的產物有目的基因自身連接、運載體自身連接和重組質粒3種．除了S基因，構建好的表達載體還應具有啟動子、終止子、標記基因等結構．
（3）在對工程細胞進行動物細胞過程中，培養(yǎng)基中通常需要加入動物血清等天然成分．細胞在生長過程中有貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理使細胞分散，以便于分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中，定期收集培養(yǎng)液，分離純化即可得到所需產品．
故答案為：
（1）目的基因
（2）同一種限制酶 DNA連接酶 3   啟動子、終止子、標記基因
（3）動物血清 貼壁生長和接觸抑制 胰蛋白酶或膠原蛋白酶

點評 本題考查了基因工程以及細胞工程的相關知識，考生要識記基因工程的相關操作工具；識記動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分以及細胞培養(yǎng)的特點；識記動物基因工程的過程等相關知識，難度適中．