Question

9．如表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，如圖中標(biāo)注了在某質(zhì)粒及某DNA片段上相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

限制酶	BamHⅠ	BcIⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列及切 割位點(diǎn)	↓ GGATCC CCTAGG ↑	↓ TGATCA ACTAGT ↑	↓ GATC CTAG ↑	↓ AAGCTT TTCGAA ↑

（1）根據(jù)表中信息，Sau3AⅠ在該質(zhì)粒上有3個(gè)酶切位點(diǎn)．在將圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建成重組質(zhì)粒進(jìn)程中，應(yīng)從表中選用的兩種限制酶是BclⅠ和HindⅢ．
（2）若將BamHⅠ酶切的DNA末端與BcIⅠ酶切的DNA末端連接，對(duì)于該連接部位B
A．BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都能切開(kāi)         B．BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都不能切開(kāi)
C．BamHⅠ酶能切開(kāi)，BcIⅠ酶不能切      D．BamHⅠ酶不能切開(kāi)，BcIⅠ酶能切開(kāi)
（3）酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)DNA連接酶作用后可形成重組質(zhì)粒．若將該重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌需用氯化鈣處理大腸桿菌，為了篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．

Answer 1

分析 解答本題的關(guān)鍵在于理解重組質(zhì)粒中標(biāo)記基因的作用．選擇限制酶需注意插入目的基因時(shí)不能破壞標(biāo)記基因．
根據(jù)題意和圖示分析可知：在質(zhì)粒上存在BamH I、BclⅠ、BamH I和HindⅢ等四個(gè)酶切位點(diǎn)，其中BamH I的切割位點(diǎn)在兩個(gè)抗性基因上都有，而抗性基因?yàn)檩d體的標(biāo)記基因，因此不可用該酶切割．在目的基因上，BclⅠ、BamH I、HindⅢ和Sau3AⅠ四種酶也存在酶切位點(diǎn)．

解答 解：（1）由于BclⅠ和HindⅢ識(shí)別序列都包含了Sau3AⅠ識(shí)別序列，所以Sau3A I在質(zhì)粒上有三個(gè)酶切位點(diǎn)．由于BamHⅠ和Sau3A I會(huì)破壞質(zhì)粒中的兩個(gè)抗性基因，不利于后期的篩選，所以應(yīng)選用限制酶為BclⅠ和HindⅢ．
（2）BamHⅠ的識(shí)別序列為$\frac{\underline{\;GGATCC\;}}{CCTAGG}$，BclⅠ酶的識(shí)別序列為$\frac{\underline{\;TGATCA\;}}{ACTAGT}$，兩種酶切割后被DNA連接酶連接，堿基序列為$\frac{\underline{\;GGATCA\;}}{CCTAGT}$，不滿(mǎn)足這兩種限制酶對(duì)識(shí)別序列的特異性要求，所以不能再被這兩種限制酶切割．
（3）酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)DNA連接酶作用后可形成重組質(zhì)粒．若將該重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌需用氯化鈣處理大腸桿菌，使之變?yōu)楦惺軕B(tài)．為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．
故答案為：
（1）3   BclⅠ和 HindⅢ
（2）B 
（3）DNA連接    氯化鈣   四環(huán)素

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱應(yīng)用和理解層次的考查．