Question

14．自養(yǎng)需氧型的硝化細菌能夠降低水體中的銨鹽，對水體有一定的凈化作用，請回答：
（1）培養(yǎng)硝化細菌時，將含固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿倒置的目的是防止冷凝形成水滴污染培養(yǎng)基（或防止培養(yǎng)基表面的水分過快揮發(fā)）．培養(yǎng)基中加入銨鹽為硝化細菌的生長提供氮源（或氮源和能量），培養(yǎng)基中沒有加入有機碳，從功能上看這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）硝化細菌純化并計數(shù)時，對照組應該涂布等量的無菌水．樣液稀釋10³倍后，取0.1mL涂布到四個平板，統(tǒng)計其菌落數(shù)分別為251、265、276、348個，可推測原樣液中硝化細菌的濃度為2.64×10⁶個/mL，該方法測定的硝化細菌的含量和實際值相比，一般偏小（填“偏大”或“偏小”）．
（3）若要探究弱酸弱堿條件下硝化細菌對銨鹽轉化能力的大小，現(xiàn)提供足量含某銨鹽的液體培養(yǎng)基及PH值分別為5、9的弱酸和弱堿緩沖液，寫出你的實驗設計思路：將含胺鹽的液體培養(yǎng)基均分成三等份，分別加入等量的弱酸、弱堿緩沖液和無菌水（作為對照）使其PH值依次調節(jié)為5、9、7，培養(yǎng)相同時間后，測定培養(yǎng)基中的胺鹽的剩余量來判斷硝化細菌對銨鹽轉換能力的大�。�

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學藥品	依據(jù)微生物產生的某種代謝產物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落．
其中，稀釋涂布平板法可用于計數(shù)活菌的數(shù)目．

解答 解：（1）微生物培養(yǎng)中將含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿倒置的目的是防止冷凝形成水滴污染培養(yǎng)基．硝化細菌能夠利用銨鹽氧化時釋放的能量，同時銨鹽也可以為硝化細菌提供氮源．硝化細菌屬于自養(yǎng)微生物，培養(yǎng)基中不需要進入碳源，從功能上看這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）硝化細菌純化并計數(shù)時，對照組應該涂布等量的無菌水．樣液稀釋10³倍后，取0.1mL涂布到四個平板，統(tǒng)計其菌落數(shù)分別為251、265、276、348個，為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)，則可推測原樣液中硝化細菌的濃度為$\frac{251+265+276}{3}$×10³×$\frac{1}{0.1}$=2.64×10⁶個/mL；由于兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落，因此該方法測定的硝化細菌的含量和實際值相比，一般偏小．
（3）探究弱酸弱堿條件下硝化細菌對銨鹽轉化能力的大小，需要設置酸性、中性、堿性三組進行相互對照，所以取含銨鹽的液體培養(yǎng)基均分成3等分，其pH值可依次調節(jié)為5、7、9（或6、7、8），培養(yǎng)相同的時間后，可通過測定培養(yǎng)基中的銨鹽的剩余量來判斷硝化細菌分解能力的大小．
故答案為：
（1）防止冷凝形成水滴污染培養(yǎng)基（或防止培養(yǎng)基表面的水分過快揮發(fā)）    氮源（或氮源和能量）     選擇
（2）無菌水     2.64×10⁶     偏小
（3）將含胺鹽的液體培養(yǎng)基均分成三等份，分別加入等量的弱酸、弱堿緩沖液和無菌水（作為對照）使其PH值依次調節(jié)為5、9、7，培養(yǎng)相同時間后，測定培養(yǎng)基中的胺鹽的剩余量來判斷硝化細菌對銨鹽轉換能力的大小

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關知識，要求考生能夠掌握無菌技術的主要內容，掌握選擇培養(yǎng)基的選擇作用，并具有一定的實驗設計能力，難度適中．