Question

白細(xì)胞介素是一類淋巴因子．研究人員將白細(xì)胞介素的基因?qū)�入到酵母�?xì)胞中，使其分泌出有活性的人白細(xì)胞介素．
（1）目的基因獲取和擴(kuò)增：
①從健康人體外周靜脈血分離得到淋巴細(xì)胞，于37℃培養(yǎng)48h，提取細(xì)胞總RNA，經(jīng)

 

作用生成cDNA．
②根據(jù)已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通過PCR擴(kuò)增獲取目的基因，此時(shí)需要加入的反應(yīng)物與生成cDNA時(shí)所加反應(yīng)物不同的是

 

（至少寫出兩種）．
（2）重組載體的構(gòu)建：由圖中可知：酶切載體和目的基因用的是

 

酶，經(jīng)DNA連接酶處理，形成重組載體．重組載體的化學(xué)本質(zhì)是

 

．
（3）將重組載體導(dǎo)入酵母細(xì)胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后，利用純化的產(chǎn)物進(jìn)行腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，可研究人的白細(xì)胞介素對(duì)

 

作用．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的切割位點(diǎn)，所以切割載體和目的基因時(shí)用限制酶EcoRⅠ與EcoR52，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組載體．

解答： 解：（1）以RNA為模板合成cDNA稱為逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄），該過程需要模板（RNA）、酶（逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）和能量．采用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲取目的基因時(shí)需要模板（cDNA）、酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）、引物．因此，根據(jù)已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通過PCR擴(kuò)增獲取目的基因，此時(shí)需要加入的反應(yīng)物與生成cDNA時(shí)所加反應(yīng)物不同的是：模板cDNA、耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物．
（2）由圖示可知載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的識(shí)別位點(diǎn)和切割位點(diǎn)，所以酶切載體和目的基因用的是兩種限制酶EcoRⅠ與EcoR52，重組載體實(shí)際上是重組DNA，因而其化學(xué)本質(zhì)是DNA．
（3）白細(xì)胞介素可治療癌癥，因此可推知白細(xì)胞介素可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖．因此利用純化的產(chǎn)物進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，可研究人白細(xì)胞介素抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用．
故答案為：
（1）反轉(zhuǎn)錄  模板cDNA  熱穩(wěn)定DNA聚合酶  引物
（2）兩種限制酶EcoRⅠ與EcoR52    DNA
（3）促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖（抑制腫瘤細(xì)胞增殖）

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖解，綜合考查免疫、基因工程、PCR技術(shù)、微生物的培養(yǎng)和分離等知識(shí)，要求考生識(shí)記人體免疫細(xì)胞的組成及特異性免疫過程；識(shí)記基因工程的工具及操作步驟；掌握純合微生物的方法，能運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)答題．