Question

【題目】【加試題】卡那霉素和頭孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素還對葡萄細胞有抑制作用。研究人員將Barnase基因（雄性不育基因）轉(zhuǎn)入葡萄細胞，利用卡那霉素和頭孢霉素，通過植物克隆方法成功培育出大粒、無核的葡萄新品種。請回答：

（1）構(gòu)建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成 以便鑒定是否混有雜菌，再用 將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB 培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)。構(gòu)建重組質(zhì)粒需要用到的工具酶是 、 。

（2）將經(jīng)過 的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，4分鐘后取出（此時已有較多農(nóng)桿菌附著在葉片小塊上）并接種到固體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時，可以看到在葉片小塊周圍出現(xiàn) 和大量菌落。這時再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是 （A．抑制葡萄細胞脫分化 B．促進葡萄細胞再分化 C．殺滅農(nóng)桿菌 D．促進農(nóng)桿菌生長）。

（3）將葉片小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，轉(zhuǎn)移至生芽培養(yǎng)基中，待其長出 后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗。卡那霉素培養(yǎng)基起著 作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是 。

（4）在卡那霉素培養(yǎng)基中，由于轉(zhuǎn)化細胞對周圍的非轉(zhuǎn)化細胞有保護作用，獲得的試管苗中可能存在假的轉(zhuǎn)基因試管苗，因此還需對試管苗的 基因的表達產(chǎn)物進行生化檢測，才能鑒別出真正的轉(zhuǎn)基因試管苗。

（5）最后，對轉(zhuǎn)基因試管苗還需進行逐漸 濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。

Answer 1

【答案】

（1）單菌落 接種環(huán) 液體 限制性核酸內(nèi)切酶 DNA連接酶

（2）消毒 愈傷 C（2分）

（3）叢狀苗 篩選 植物組織培養(yǎng)

（4） β―葡糖苷酸酶

（5）降低

【解析】

（1）構(gòu)建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因 的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成單菌落以便鑒定是否混有雜菌，再用接種環(huán)將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB液體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)。構(gòu)建重組質(zhì)粒需要用到的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶 、DNA連接酶。

（2）將經(jīng)過消毒的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，4分鐘后取出（此時已有較多農(nóng)桿菌附著在葉片小塊上） 并接種到固體培 養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時，可以看到在葉片小塊周圍出現(xiàn)愈傷和大量菌落。這時再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是殺滅農(nóng)桿菌。

（3）將葉片小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，轉(zhuǎn)移至生芽培養(yǎng)基中，待其長出叢狀苗后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗�？�那霉素培養(yǎng)基起著篩選作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是植物組織培養(yǎng)。

（4）在卡那霉素培養(yǎng)基中，由于轉(zhuǎn)化細胞對周圍的非轉(zhuǎn)化細胞有保護作用，獲得的試管苗中可能存在假的轉(zhuǎn)基因試管苗，因此還需對試管苗的β―葡糖苷酸酶基因的表達產(chǎn)物進行生化檢測，才能鑒別出真正的轉(zhuǎn)基因試管苗。

（5）最后，對轉(zhuǎn)基因試管苗還需進行逐漸降低濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。