Question

11．以下是有關(guān)現(xiàn)代生物科技的兩個問題，請回答：
Ⅰ下面是與動物細(xì)胞工程有關(guān)的問題，請分析回答：
（1）在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，首先要將動物組織剪碎，然后用胰蛋白酶處理，以使其分散成單個細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液．
（2）氣體環(huán)境中CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（3）應(yīng)用于核移植的供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是10代以后細(xì)胞沒有發(fā)生遺傳物質(zhì)的突變．
（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，具有特異性強(qiáng)，靈敏度高的特點(diǎn)．
Ⅱ轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示，圖中PstI、SmaI、EcoRI，ApaI等為限制質(zhì)粒和抗病基因上的箭頭表示限制酶的切割位點(diǎn)．如圖表示四種限制酶的識別序列及酶切點(diǎn)．

限制酶	PstI	SmaI	EcoRI	ApaI
識別序列 及酶切位點(diǎn)	-CTGCA↓G- -G↑ACGTC-	-CCC↓GGG- -GGG↑CCC-	-G↓AATTC- -CTTAA↑G-	-GGGCC↓C- -C↑CCGGG-

（1）若要獲得抗病基因，能否用限制酶SmaI對圖中對應(yīng)的位點(diǎn)進(jìn)行切割？不能．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒能否用PstI、ApaI限制酶切割質(zhì)粒？不能．
（2）卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長，根據(jù)這一原理可以利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的香蕉細(xì)胞．由此推斷重組質(zhì)粒中應(yīng)含有抗卡那霉素基因，作為標(biāo)記基因．
（3）②、③階段是否可使用同種培養(yǎng)基？不能．

Answer 1

分析 1、動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
2、分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，其中SmaⅠ酶的切割位點(diǎn)位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點(diǎn)．所以要活動重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進(jìn)行切割．①→②表示脫分化過程、②→③表示再分化過程、④是新植體．

解答 解：Ⅰ（1）在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，首先要將動物組織剪碎，然后用胰蛋白酶處理，以使其分散成單個細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液．
（2）氣體環(huán)境中CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（3）應(yīng)用于核移植的供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是10代以后細(xì)胞沒有發(fā)生遺傳物質(zhì)的突變，能保持正常的二倍體核型．
（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，優(yōu)點(diǎn)是：特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備．
Ⅱ（1）因為限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)位于抗病基因上，對SmaⅠ位點(diǎn)進(jìn)行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ對圖中對應(yīng)的位點(diǎn)進(jìn)行切割．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，也不能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割質(zhì)粒，因為含有抗病基因的外源DNA分子上沒有ApaⅠ限制酶切割位點(diǎn)．
（2）欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時含有抗卡那霉素基因，作為標(biāo)記基因．
（3）決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細(xì)胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要．②、③階段培養(yǎng)基中生長素與細(xì)胞分裂素的比值不同，因此這兩個階段不能是用同種培養(yǎng)基．
故答案為：
I （1）胰蛋白酶
（2）維持培養(yǎng)液pH
（3）遺傳物質(zhì)的突變（答遺傳物質(zhì)的改變也可）
（4）特異性強(qiáng)，靈敏度高
II  （1）不能    不能      （2）抗卡那霉素      （3）不能

點(diǎn)評 本題考查動物細(xì)胞培養(yǎng)、基因工程等知識，要求考生識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件；識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．