Question

【題目】 血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O2或CO2的運(yùn)輸。請根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。

（1）將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整：A為________________，B為______________。凝膠色譜法是根據(jù)__________________來分離蛋白質(zhì)的有效方法。

（2）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除________，洗滌次數(shù)過少，無法完全除去。

（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7．0)的目的是_____________________________如果紅色區(qū)帶______________，說明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 相對分子質(zhì)量的大小 雜蛋白(或血漿蛋白) 能夠準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致，同時還可加速樣品在凝膠柱中的流動 均勻一致地移動

【解析】

1、血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：
（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放。
（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。
（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)。
（4）純度鑒定：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
2、分析題圖：A表示血紅蛋白的釋放，B表示樣品的加入和洗脫。

（1）樣品處理和粗分離過程為：紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析，所以A表示血紅蛋白的釋放。粗分離得到的蛋白質(zhì)可用凝膠色譜法進(jìn)行純化，其中B表示樣品的加入和洗脫。凝膠色譜法的原理是分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。即凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)的有效方法。
（2）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜質(zhì)蛋白。
（3）磷酸緩沖液（pH為7.0）能夠準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致，同時可加速樣品在凝膠柱中的流動。如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻一致地移動。