Question

如圖1是以鮮蘋果汁為原料生產(chǎn)果酒及蘋果醋的過程簡圖及有關(guān)裝置圖，據(jù)圖回答：

（1）某同學(xué)用圖2中A裝置進(jìn)行果酒的制作，所用到的酵母菌的代謝類型是

 

，若要檢測是否產(chǎn)生了酒精可用

 

試劑進(jìn)行檢測．該同學(xué)每隔12h左右就要將瓶蓋擰松一次，但又不打開，這樣做的目的是

 

．
（2）天然釀酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶類，用做發(fā)酵原料的淀粉需經(jīng)一系列復(fù)雜的過程轉(zhuǎn)化為葡萄糖才能被利用．研究者從某絲狀真菌中獲取淀粉酶基因的

 

，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到相應(yīng)的cDNA，再對目的基因大量擴增后，將其插入到質(zhì)粒上以構(gòu)建

 

，并導(dǎo)入釀酒酵母菌體內(nèi)，以期得到能迅速分解淀粉的釀酒酵母菌．現(xiàn)已在受體菌內(nèi)檢測到淀粉酶基因，若要進(jìn)一步檢測是否合成了淀粉酶，可采用

 

的方法進(jìn)行檢測．
（3）為篩選出能高效利用淀粉的轉(zhuǎn)基因釀酒酵母菌，將該工程菌接種在

 

的固體平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一定時間后，加入碘液，選擇

 

的菌落進(jìn)一步純化培養(yǎng)．
（4）為了了解純化培養(yǎng)過程種群數(shù)量的變化，某同學(xué)連續(xù)7 天測定恒定體積和濃度的培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量，需要用7支試管來培養(yǎng)并持續(xù)分別測定的原因是

 

．
在觀察計數(shù)中以下操作正確的有

 

（填下列操作的序號）．
A．將適量干酵母放入裝有一定濃度葡萄糖溶液的試管中，在適宜條件下培養(yǎng)
B．靜置一段時間后，用吸管從試管中吸取培養(yǎng)液
C．在血球計數(shù)板中央滴一滴培養(yǎng)液，蓋上蓋玻片
D．用濾紙吸除血球計數(shù)板邊緣多余培養(yǎng)液
E．將計數(shù)板放在載物臺中央，待酵母菌沉降到計數(shù)室底部，在顯微鏡下觀察、計數(shù)
（5）純化的轉(zhuǎn)基因酵母菌可制備成固定化酵母細(xì)胞用于葡萄酒生產(chǎn)．以下為相關(guān)流程圖：

以上實驗操作中最關(guān)鍵的步驟是

 

．本實驗采用的包埋法，而制備固定化酶則不宜用此方法，原因是

 

．實驗過程中用CaCl₂溶液處理的目的是

 

．
（6）某同學(xué)在利用A裝置得到的酒精轉(zhuǎn)移到B裝置中再繼續(xù)進(jìn)行果醋的制作，該過程中使用到的微生物是

 

，溫度需要控制在

 

℃范圍內(nèi)．

Answer 1

考點：酒酵母制酒及乙酸菌由酒制醋,制備和應(yīng)用固相化酶

專題：

分析：分析圖1：甲表示果酒發(fā)酵，乙表示果醋發(fā)酵．
分析圖2：充氣口的作用是在果醋制作時通入氧氣的；排氣口的作用是排氣（CO₂），其長而彎曲的好處是防止雜菌和浮塵的污染．

解答： 解：（1）酵母菌的代謝類型是異養(yǎng)兼性厭氧型；酒精可以用酸性的重鉻酸鉀溶液檢測；該同學(xué)每隔12h左右就要將瓶蓋擰松一次，但又不打開，這樣做的目的是及時排出CO₂氣體，同時防止酵母菌進(jìn)行有氧呼吸和發(fā)酵液被雜菌污染．
（2）逆轉(zhuǎn)錄是以mRNA為模板合成DNA的過程，因此要逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，因此從該絲狀真菌中獲取淀粉酶基因的mRNA；獲取目的基因后進(jìn)行大量擴增，再將其插入到質(zhì)粒上以構(gòu)建基因表達(dá)載體，并導(dǎo)入釀酒酵母菌體內(nèi)，以期得到能迅速分解淀粉的釀酒酵母菌．要檢測釀酒酵母菌是否合成了淀粉酶，可采用抗原-抗體雜交法．
（3）為篩選出能高效利用淀粉的轉(zhuǎn)基因釀酒酵母菌，將該工程菌接種在以淀粉作為唯一碳源的固體平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一定時間后，加入碘液；淀粉酶能催化淀粉水解，形成透明圈，因此最終應(yīng)選擇透明圈大的菌落進(jìn)一步純化培養(yǎng)．
（4）為了了解純化培養(yǎng)過程種群數(shù)量的變化，某同學(xué)連續(xù)7天測定恒定體積和濃度的培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量，需要用7支試管來培養(yǎng)并持續(xù)分別測定可以避免前一次吸取酵母菌培養(yǎng)液對以后測定酵母菌數(shù)量的影響．
A、將適量干酵母放入裝有一定濃度葡萄糖溶液的試管中，在適宜條件下培養(yǎng)，A正確；
B、應(yīng)振蕩搖勻后，用吸管從試管中吸取培養(yǎng)液，B錯誤；
C、應(yīng)先蓋上蓋玻片，再在血球計數(shù)板中央滴一滴培養(yǎng)液，C錯誤；
D、用濾紙吸除血球計數(shù)板邊緣多余培養(yǎng)液，D正確；
E、將計數(shù)板放在載物臺中央，待酵母菌沉降到計數(shù)室底部，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，E正確．
故選：ADE．
（5）制備固定化酵母細(xì)胞的操作中，最關(guān)鍵的步驟是配制海藻酸鈉溶液．酶分子很小，容易從包埋材料中漏出，因此制備固定化酶時不宜用此方法．用CaCl₂溶液處理的目的是有利于形成凝膠珠（Ca²⁺與海藻酸鈉反應(yīng)形成不溶于水的海藻酸鈣凝膠）．
（6）果醋制作過程中使用到的微生物是醋酸桿菌，溫度需要控制在30-35℃范圍內(nèi)．
故答案為：
（1）異養(yǎng)兼性厭氧型  酸性重鉻酸鉀及時排出CO₂氣體，以及防止酵母菌進(jìn)行有氧呼吸和發(fā)酵液被雜菌污染．
（2）mRNA   基因表達(dá)載體    抗原-抗體雜交
（3）以淀粉作為唯一碳源    透明圈大
（4）避免了前一次吸取酵母菌培養(yǎng)液對以后測定酵母菌數(shù)量的影響　ADE
（5）配制海藻酸鈉溶液    酶分子很小，容易從包埋材料中漏出    有利于形成凝膠珠（Ca²⁺與海藻酸鈉反應(yīng)形成不溶于水的海藻酸鈣凝膠）
（6）醋酸桿菌  30-35

點評：本題綜合考查果酒和果醋的制作、固定化酵母細(xì)胞、基因工程等植物，要求考生掌握果酒和果醋制作的原理及條件；識記基因工程的技術(shù)及操作步驟；識記固定化酵母細(xì)胞的操作步驟及采用的方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．