Question

5．回答有關(guān)基因工程的問題
嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗(yàn)．
（1）通常情況下，獲得的目的基因需要進(jìn)行擴(kuò)增，最簡(jiǎn)便的方法是PCR擴(kuò)增 技術(shù)．
如圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜．下表為限制酶的酶切位點(diǎn)．

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	NdeⅠ
識(shí)別序列 及切割位點(diǎn)	G↓GATCC	A↓AGCTT	G↓AATTC	CA↓TATG

（2）如圖的質(zhì)粒上有多個(gè)酶切位點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)中沒有選擇XbaI酶切割質(zhì)粒，原因是由于Xbal在質(zhì)粒不止一個(gè)酶切位點(diǎn)．
（3）分析如圖，可選擇兩種不同的限制酶NdeⅠ 和BamHⅠ切割質(zhì)粒，以防止質(zhì)粒自身環(huán)化．質(zhì)粒被切割后，可用DNA連接酶 將其與目的基因連接．在動(dòng)物基因工程中將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞時(shí)通常的方法是顯微注射技術(shù)．
（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶．

Answer 1

分析 基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因．
限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子和終止子之間

解答 解：（1）通常情況下，獲得的目的基因需要進(jìn)行擴(kuò)增，最簡(jiǎn)便的方法是PCR擴(kuò)增技術(shù)．
（2）根據(jù)啟動(dòng)子和終止子的生理作用可知，目的基因應(yīng)導(dǎo)入啟動(dòng)子和終止子之間．圖中看出，兩者之間存在于三種限制酶切點(diǎn)，但是由于Xbal在質(zhì)粒不止一個(gè)酶切位點(diǎn)，因此本實(shí)驗(yàn)中沒有選擇XbaI酶切割質(zhì)粒．
（3）分析如圖，以防止質(zhì)粒自身環(huán)化，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識(shí)別序列，在用DNA連接酶將其與目的基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒．如果受體細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞，常用顯微注射技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．
（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶．
故答案為：
（1）PCR擴(kuò)增
（2）由于Xbal在質(zhì)粒不止一個(gè)酶切位點(diǎn)
（3）NdeⅠBamHⅠDNA連接酶   
（4）轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程原理，考查學(xué)生分析問題和解決問題的能力．