Question

【題目】某研究所以馬尾藻巖藻聚糖（SF）為研究對(duì)象，體外培養(yǎng)小鼠肉瘤細(xì)胞S180，做抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)的研究。下列為部分實(shí)驗(yàn)步驟與結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)步驟：

①將S180腫瘤細(xì)胞以RPMI1640為培養(yǎng)液，在5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

②將上述培養(yǎng)過的S180腫瘤細(xì)胞經(jīng)酶消化，按1×103～1×105個(gè)·mL-1接種到96孔培養(yǎng)板，適宜條件下培養(yǎng)24h、48h、72h、96h后，以MTT法（又稱比色法，一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長的方法）于波長490nm處測(cè)定OD值，結(jié)果如圖1。

③在適宜的培養(yǎng)條件和恰當(dāng)?shù)?/span>S180腫瘤細(xì)胞接種濃度下，研究不同濃度（0mg·mL-1、0．1mg·mL-1、0．5mg·mL-1、1mg·mL-1、2mg·mL-1、4mg·mL-1、8mg·mL-1、10mg·mL-1、15mg·mL-1、20mg·mL-1、25mg·mL-1、30mg·mL-1）的SF對(duì)S180腫瘤細(xì)胞增殖的抑制情況，96h后以MTT法于波長490nm處測(cè)定OD值，結(jié)果如圖2。

請(qǐng)回答下列問題：

（1）步驟①中以RPMI1640為培養(yǎng)液培養(yǎng)S180腫瘤細(xì)胞的原理是__________。培養(yǎng)液中除細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)之外，通常還添加一定量的__________，以防培養(yǎng)過程中的污染。

（2）步驟②中“消化”所使用的酶是__________，為減少OD值測(cè)定的誤差，應(yīng)注意__________。

（3）已知在一定細(xì)胞數(shù)目范圍內(nèi)，MTT法測(cè)得的OD值與活細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，由圖1可知步驟③中恰當(dāng)?shù)?/span>S180腫瘤細(xì)胞接種濃度為__________個(gè)·mL-1。

（4）圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)SF濃度與細(xì)胞增殖的抑制作用呈__________（選填“正相關(guān)”或“負(fù)相關(guān)），當(dāng)SF濃度達(dá)到__________mg·mL-1時(shí)細(xì)胞增殖的抑制作用達(dá)到極限，繼續(xù)增加SF濃度對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用變化不明顯。

Answer 1

【答案】細(xì)胞增殖 抗生素 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 多測(cè)量，取平均值 5×103 正 25

【解析】

（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理：細(xì)胞增殖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。②營養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。在使用合成培養(yǎng)基時(shí)通常需加入血清、血漿等一些天然成分。③溫度和PH。④氣體環(huán)境：細(xì)胞所需的氣體主要是O2和CO2。

（2）根據(jù)題干信息，在一定細(xì)胞數(shù)目范圍內(nèi)，MTT法測(cè)得的OD值與活細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，圖2表示S180腫瘤細(xì)胞在不同濃度SF作用下生長曲線，SF濃度越大OD值越小，腫瘤細(xì)胞的數(shù)量越少，說明SF抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。

（1）培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的原理是細(xì)胞增殖。培養(yǎng)液中除細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)之外，通常還添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。

（2）步驟②中“消化”所使用的酶是胰蛋白酶，其作用是使動(dòng)物組織細(xì)胞分散開，以獲得細(xì)胞懸液。在實(shí)驗(yàn)中求平均值可以減少實(shí)驗(yàn)誤差，所以為減少OD值測(cè)定的誤差,應(yīng)注意多次測(cè)量并求平均值。

（3）已知在一定細(xì)胞數(shù)目范圍內(nèi)，MTT法測(cè)得的OD值與活細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，所以由圖1可知步驟③中恰當(dāng)?shù)?/span>S-180腫瘤細(xì)胞接種濃度為5×103個(gè)·mL-1。

（4）圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)，SF濃度與細(xì)胞增殖的抑制作用呈正相關(guān)，當(dāng)SF濃度達(dá)到25mg·mL-1時(shí)細(xì)胞增殖的抑制作用達(dá)到極限，繼續(xù)增加SF濃度對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用變化不明顯。