Question

1．如圖為培育轉基因小鼠的部分過程示意圖．請回答下列問題：

（1）若需在短時間內獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術．若需在短時間內獲得較多的
轉基因小鼠，可以將處于桑椹胚或囊胚期的早期胚胎進行胚胎分割移植．
（2）目的基因不能直接、單獨注入A細胞的原因是目的基因不能在受體細胞穩(wěn)定存在（并遺傳給下一代）和表達，因此需要構建含有目的基因的表達載體（或重組質粒）．
（3）圖中的A細胞通常為受精卵細胞，將目的基因導入該細胞常用的方法是顯微注射法．
（3）小鼠出生后可用其尾巴進行DNA檢測，通過DNA分子雜交方法，檢測出攜帶目的基因的小鼠．至于目的基因是否合成相應的蛋白質，可從轉基因小鼠中提取蛋白質，并用相應的抗體進行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現，則表明小鼠體內的目的基因已表達．
（4）在目的基因導入小鼠的A細胞時，目的基因可能隨機地插入到該細胞的DNA中．這些細胞有的能發(fā)育成轉基因小鼠，有的卻死亡．請分析目的基因插入后導致有些A細胞死亡的最可能原因外源基因的插入使受精卵內生命活動必需的某些基因不能正常表達．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）體外擴增DNA（基因）應用PCR技術．來自同一個胚胎的后代具有相同的遺傳物質，因此要在短時間內獲得較多的轉基因小鼠，可采用胚胎分割移植技術，一般選項發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚進行切割．
（2）由于目的基因不能在受體細胞穩(wěn)定存在（并遺傳給下一代）和表達，因此將目的基因導入受體細胞前需要構建基因表達載體．
（3）將目的基因導入受體細胞，如受體細胞是動物細胞常用受精卵，導入的方法是顯微注射法．
（4）檢測外源基因是否導入受體細胞用DNA分子雜交技術，檢測目的基因是否成功表達蛋白質采用抗原-抗體雜交技術，如出現雜交帶，則表明已表達．
（5）外源基因導入使小鼠死亡，可能是小鼠發(fā)育所必需的蛋白質不存在，即這些基因可能被破壞不能正常表達．
答案：
（1）PCR    桑椹胚或囊胚期    胚胎分割移植
（2）目的基因不能在受體細胞穩(wěn)定存在（并遺傳給下一代）和表達     表達載體（或重組質粒）
（3）受精卵    顯微注射法
（4）DNA分子雜交    抗原-抗體      已表達
（5）外源基因的插入使受精卵內生命活動必需的某些基因不能正常表達

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)問題，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．