Question

12．多不飽和脂肪酸需要從膳食中攝取，而不能被人體直接合成．科學(xué)家通過轉(zhuǎn)基因手段將w-6脂肪酸脫氫酶基因（FAT1）整合到肉�；�因組，以期提高肉牛體內(nèi)的多不飽和脂肪酸含量，促進(jìn)人體健康．請回答下列問題：
（1）將w-6脂肪酸脫氫酶基因（FAT1）導(dǎo)入到肉牛細(xì)胞中常用的方法是顯微注射法，在用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，需要的條件除擴(kuò)增緩沖液、模板DNA、4種原料和能量外，還需要引物和Taq酶．
（2）構(gòu)建好的基因表達(dá)載體主要包括復(fù)制原點(diǎn)、啟動子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因，其中啟動子功能是RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（3）哺乳動物的脂肪細(xì)胞來源于前脂肪細(xì)胞，脂肪組織體積增大是前脂肪細(xì)胞分裂和分化和脂肪細(xì)胞的生長結(jié)果．
（4）在體外培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞，需過濾脂肪組織血管基質(zhì)，并經(jīng)胰蛋白酶消化而得到單個前脂肪細(xì)胞，進(jìn)行原代培養(yǎng)．體外培養(yǎng)細(xì)胞的操作及培養(yǎng)過程均需要在無菌條件下進(jìn)行．成熟組織細(xì)胞間質(zhì)少、細(xì)胞松散，所以隨著前脂肪細(xì)胞的分化，細(xì)胞貼壁生長性能下降．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：
（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞常用顯微注射法；在用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，需要的條件主要有擴(kuò)增緩沖液、模板DNA、4種原料、特定引物和Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶）．
（2）構(gòu)建好的基因表達(dá)載體主要包括復(fù)制原點(diǎn)、啟動子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因，其中啟動子功能是RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（3）哺乳動物的脂肪細(xì)胞來源于前脂肪細(xì)胞，脂肪組織體積增大是前脂肪細(xì)胞分裂和分化和脂肪細(xì)胞的生長結(jié)果．
（4）在體外培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞，需過濾脂肪組織血管基質(zhì)，并經(jīng)胰蛋白酶消化而得到單個前脂肪細(xì)胞，進(jìn)行原代培養(yǎng)．體外培養(yǎng)細(xì)胞的操作及培養(yǎng)過程均需要在無菌條件下進(jìn)行．成熟組織細(xì)胞間質(zhì)少、細(xì)胞松散，所以隨著前脂肪細(xì)胞的分化，細(xì)胞貼壁生長性能下降．
故答案為：
（1）顯微注射法         引物和Taq酶
（2）RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
（3）分裂和分化      生長
（4）胰蛋白酶         無菌       下降

點(diǎn)評 本題考查基因工程、植物組織培養(yǎng)等知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具、操作步驟等知識，識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程，再結(jié)合所學(xué)的知識答題．